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研究級(jí)的分光光度計(jì)定量分析條件的選擇

更新時(shí)間:2022-06-22      點(diǎn)擊次數(shù):704
  研究級(jí)的分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室普及率高的一種光譜儀器,由于靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、適用濃度范圍廣,長(zhǎng)期在分析領(lǐng)域扮演很重要的角色。
 
  紫外光譜通常是以吸收曲線的形式表示。縱坐標(biāo)為吸收強(qiáng)度(ε)用lgε表示,也有用吸光度(A)或透光率T表示。橫坐標(biāo)多用波長(zhǎng)(λ)表示,單位為nm。當(dāng)化合物的大吸收在某波長(zhǎng)位置時(shí),則波長(zhǎng)用λmax表示。對(duì)于同一物質(zhì),濃度不同時(shí),各波長(zhǎng)處的吸光度值不一樣。但吸收曲線相似,大吸收波長(zhǎng)不變。
 
  研究級(jí)的分光光度計(jì)用來測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器??梢詼y(cè)定核酸和蛋白的濃度,也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度,紫外分光光度計(jì)又可分為單光束,假雙光束,雙光束。它們的用途又有區(qū)別。
 
  單光束:適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度,一般不能作全波段光譜掃描,要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。
 
  雙光束:自動(dòng)記錄,快速全波段掃描??上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響,特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜,價(jià)格較高。
 
  假雙光束也就是比例雙光束,它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束,一束直接到達(dá)檢測(cè)器,另一束通過樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測(cè)器。這種儀器的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化帶來的誤差,但是并不能消除參比造成的影響。
 
  定量分析條件的選擇:
 
  1、測(cè)量波長(zhǎng)的選擇:一般選用待測(cè)物質(zhì)的大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng)(入射光);但當(dāng)在大吸收波長(zhǎng)處有干擾時(shí),則應(yīng)根據(jù)“吸收大干擾小”的原則來選擇波長(zhǎng)。
 
  2、控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶河蓽y(cè)量誤差可知,當(dāng)吸光度在0.2~0.8之間時(shí),測(cè)量誤差小,所以應(yīng)盡量控制吸光度在此范圍進(jìn)行測(cè)定??刂频姆椒椋嚎刂迫芤旱臐舛龋贿x用適當(dāng)厚度的比色皿。

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